# Protokoll des Versuchs Gaschromatographie

## Reaktionskinetik

### Versuchsdurchführung

Vor dem Versuch wurde vom Betreuer die **Referenzlösung** bestehend aus  
2650 µl Puffer, 100 µl Semicarbazid-HCl, 200 µl NAD und 10 µl GSH  
in die Referenzküvette pipettiert und der Nullabgleich des Spektrometers durchgeführt.

Wir führten **11 Enzymtests** durch.  
Zunächst wurden 2500 µl Puffer, 100 µl Semicarbazid-HCl, 200 µl NAD, 10 µl GSH und 100 µl Ethanol-Testlösung gemischt und im Spektrometer temperiert. Danach wurde die entsprechende Menge Ethanol hinzugegeben — im ersten Versuch 0 µl und in den weiteren Versuchen jeweils 10 µl mehr. Das Gemisch wurde dann 240 s lang im Spektrometer gemessen.

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## Auswertung 1

| Ethanol [µl] | n [µmol] | Vges [ml] | cs [mmol/l] | 1/cs [l/mmol] |
|---------------|-----------|------------|--------------|---------------|
| 0 | 0,00 | 2,96 | 0,00 | ∞ |
| 10 | 173,28 | 2,96 | 58,54 | 0,0171 |
| 20 | 346,56 | 2,96 | 117,08 | 0,0085 |
| 30 | 519,84 | 2,96 | 175,62 | 0,0057 |
| 40 | 693,12 | 2,96 | 234,16 | 0,0043 |
| 50 | 866,40 | 2,96 | 292,70 | 0,0034 |
| 60 | 1039,68 | 2,96 | 351,24 | 0,0028 |
| 70 | 1212,96 | 2,96 | 409,78 | 0,0024 |
| 80 | 1386,24 | 2,96 | 468,32 | 0,0021 |
| 90 | 1559,52 | 2,96 | 526,86 | 0,0019 |
| 100 | 1732,80 | 2,96 | 585,40 | 0,0017 |

*Tabelle 1: Messprotokoll I*

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| Ethanol [µl] | ΔE/Δt (min⁻¹) | v₀ (µmol l⁻¹ min⁻¹) | 1/v₀ (l min µmol⁻¹) | v₀/cs (10⁻³ min⁻¹) |
|---------------|----------------|---------------------|---------------------|--------------------|
| 0 | 0,0084 | 0,00026 | 3846,15 | ∞ |
| 10 | 0,0101 | 0,00034 | 1515,15 | 0,000002 |
| 20 | 0,1926 | 0,00554 | 180,50 | 0,000019 |
| 30 | 0,4092 | 0,01148 | 87,10 | 0,000027 |
| 40 | 0,4385 | 0,01196 | 83,61 | 0,000022 |
| 50 | 0,6109 | 0,01683 | 59,41 | 0,000024 |
| 60 | 0,6084 | 0,01665 | 60,06 | 0,000020 |
| 70 | 0,6593 | 0,01817 | 55,03 | 0,000018 |
| 80 | 0,6354 | 0,01738 | 57,53 | 0,000016 |
| 90 | 0,7997 | 0,02272 | 44,01 | 0,000017 |
| 100 | 0,8794 | 0,02440 | 40,98 | 0,000017 |

*Tabelle 2: Messprotokoll II (ΔE/Δt durch lineare Regression bestimmt)*

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## Auswertung 2 – Lineweaver-Burk

- Steigung: m = 0,00000965 × 10⁻³ min⁻¹  
- Achsenabschnitt: b = 0,00288 µmol/l  
- KM = 0,0033 mmol/l  
- v₀,max = 347,22 l min/µmol  

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## Auswertung 3 – Eadie-Hofstee

- Steigung: m = −861,76 × 10⁻³ min⁻¹  
- Achsenabschnitt: b = 0,37 µmol l⁻¹ min⁻¹  
- KM = 861,76 mmol l⁻¹  
- v₀,max = b  

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## Auswertung 4 – Michaelis-Menten

- KM = 0,015  
- v₀,max = 0,03  

Die Michaelis-Menten-Auftragung ist sehr einfach, da die maximale Geschwindigkeit und die Konstante direkt aus der Formel abgelesen werden können. Diese Methode ist genauer und erfordert kaum Rechenzeit.

Bei Lineweaver-Burk und Eadie-Hofstee werden die Werte mithilfe von Ausgleichsgeraden bestimmt. Da die Geraden unterschiedlich (linear oder logarithmisch) aufgetragen werden können, ergeben sich abweichende Werte. Zudem können durch ungenaues Ablesen Rundungsfehler entstehen.

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## Auswertung 5 – Temperaturabhängigkeit

Die Geschwindigkeitskonstante *k* hängt exponentiell von der Umgebungstemperatur *T* ab:

\[
k = k_0 \, e^{-\frac{E_A}{RT}}
\]

Diese Konstante beeinflusst die Michaelis-Menten-Gleichung, welche wiederum die Reaktionsgeschwindigkeit bestimmt. Eine Temperaturänderung führt also zu einer Änderung der Reaktionsgeschwindigkeit.  
Damit die Temperatur während des Versuchs konstant bleibt, wird die Lösung **vor Beginn temperiert**. So hängt die Reaktionsgeschwindigkeit nur noch von der Änderung der Stoffmenge ab.